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人總雙微基因2(MDM2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒

簡要描述:人總雙微基因2(MDM2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本生生物公司供應(yīng):ELISA試劑盒,血清,熒光定量PCR耗材,移液器吸嘴,微量離心管,進口凍存管,細胞培養(yǎng)皿,培養(yǎng)板,培養(yǎng),吸頭,儀器及手套,色譜耗材,針頭過濾器。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 產(chǎn)       地:天津市
  • 更新時間:2021-12-06
  • 訪  問  量:1475
詳細介紹
品牌其他品牌產(chǎn)地國產(chǎn)
級別其他規(guī)格96T/48T

人總雙微基因2(MDM2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:

96T

6pg/ml-200pg/ml

使用目的:

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中總雙微基因 2(MDM2)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人總雙微基因 2(MDM2)水平。用純化的人總雙微基因  2(MDM2)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總雙微基因 2(MDM2),再與 HRP 標記的總雙微基因  2(MDM2)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP  酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總雙微基因 2(MDM2)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD  值),通過標準曲線計算樣品中人總雙微基因 2(MDM2)濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(400pg/ml) 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

200pg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

100pg/ml 4 號標準品 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

50pg/ml 3 號標準品 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

25pg/ml 2 號標準品 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

12.5pg/ml 1 號標準品 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣  50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl, 然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡  量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 后棄去,如此 重復(fù) 5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同 3。

8. 洗滌:操作同 5。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié):

操作程序總結(jié):.png

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD  值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù), 即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值

大于標準品孔孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(

n 倍)后再測定,計 算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

人總雙微基因2(MDM2)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

 


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