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ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)溢值的原因分析

更新時(shí)間:2025-06-25    點(diǎn)擊次數(shù):632

  ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)溢值的原因分析

以下是天津本生對(duì)ELISA實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)溢值(OD值超出檢測(cè)范圍)的常見(jiàn)原因及解決方案:

一、樣本與標(biāo)準(zhǔn)品問(wèn)題

稀釋錯(cuò)誤‌

樣本或標(biāo)準(zhǔn)品未按說(shuō)明書(shū)要求稀釋,濃度過(guò)高導(dǎo)致信號(hào)過(guò)強(qiáng)。

解決‌:嚴(yán)格遵循稀釋比例,使用試劑盒配套稀釋液。

樣本污染‌

樣本混入雜質(zhì)(如溶血、細(xì)菌污染)或交叉污染,引發(fā)非特異性反應(yīng)。

解決‌:離心處理樣本,避免重復(fù)使用吸頭,操作時(shí)分區(qū)處理樣本。

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  二、實(shí)驗(yàn)操作因素

孵育條件不當(dāng)‌

溫度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng),加速抗原抗體結(jié)合及底物顯色。

解決‌:校準(zhǔn)孵育箱溫度,使用計(jì)時(shí)器控制時(shí)間。

未覆蓋酶標(biāo)板‌

孵育時(shí)未蓋板導(dǎo)致液體蒸發(fā),局部濃度升高。

解決‌:每次孵育均使用配套封板膜。

顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)‌

TMB底物顯色超過(guò)說(shuō)明書(shū)建議時(shí)間,OD值異常升高。

解決‌:顯色后密切觀察,及時(shí)終止反應(yīng)。

三、試劑與設(shè)備問(wèn)題

偶聯(lián)試劑濃度過(guò)高‌

HRP標(biāo)記抗體或鏈霉親和素未正確稀釋,信號(hào)放大過(guò)度。

解決‌:按說(shuō)明書(shū)現(xiàn)配現(xiàn)用,避免濃縮液直接使用。

檢測(cè)波長(zhǎng)錯(cuò)誤‌

酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置與底物要求不匹配(如TMB應(yīng)為450nm)。

解決‌:校準(zhǔn)儀器,核對(duì)說(shuō)明書(shū)波長(zhǎng)參數(shù)。

洗滌不充分‌

未結(jié)合的試劑殘留導(dǎo)致背景升高,間接引發(fā)溢值。

解決‌:增加洗滌次數(shù)(3-5次),拍干孔內(nèi)液體。

四、其他注意事項(xiàng)

避免使用錯(cuò)誤稀釋液‌:僅使用試劑盒內(nèi)配套稀釋液。

分裝試劑‌:避免反復(fù)凍融導(dǎo)致活性異常。

質(zhì)控對(duì)照‌:設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照,監(jiān)控實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)穩(wěn)定性。

通過(guò)排查上述環(huán)節(jié)并規(guī)范操作,可有效減少溢值現(xiàn)象。

注:以上資料僅供參考,不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù),具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或產(chǎn)品品牌供應(yīng)商。

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