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UDP葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)資料

更新時(shí)間:2024-10-21    點(diǎn)擊次數(shù):1062

  UDP葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)ELISA檢測(cè)試劑盒技術(shù)資料

  檢測(cè)原理:

  UDP葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)ELISA檢測(cè)試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)方法。向預(yù)包被了抗體的微孔板中,加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本,溫育后,加入生物素標(biāo)記抗體和過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。經(jīng)過(guò)溫育和洗滌結(jié)合形成的免疫復(fù)合物,去除未結(jié)合的酶,然后加入顯色底物TMB。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子濃度呈正相關(guān)。最后,在450 nm處測(cè)定反應(yīng)孔樣品吸光度(OD)值,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本待測(cè)因子的濃度。

  適用樣本:

  血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和組織等。

  實(shí)驗(yàn)方法:

  雙抗夾心法。

  產(chǎn)品別名:

  UGCG;GCS;GLCT1;UDP-glucose ceramide glucosyltransferase;ceramide glucosyltransferase;UDP-glucose:N-acylsphingosine D-glucosyltransferase;glucosylceramide synthase;glycosylceramide synthase;UDP葡萄糖神經(jīng)酰胺葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UGCG)

  試劑盒組分

  ELISA酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體、濃縮HRP酶結(jié)合物、酶結(jié)合物稀釋液、生物素化抗體稀釋液、標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物溶液(TMB)、反應(yīng)終止液、封板覆膜

  需自備物品

  1.酶標(biāo)儀(450nm檢測(cè)波長(zhǎng)濾光片,570nm或630nm校正波長(zhǎng)濾光片) ;

  2.洗板機(jī)(可調(diào)注液量,保證每孔350μl洗液而不溢出);

  3.高精度單道加液器;

  4.高精度多道加液器;

  5.37℃恒溫箱;

  6.低溫離心機(jī);

  7.純凈水或蒸餾水。

  操作步驟

  1.從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗(yàn)所需板條,未用的板條和干燥劑請(qǐng)放回鋁箔袋內(nèi)封存于2-8℃;

  2.分別將標(biāo)本或不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品加入相應(yīng)孔中(100μl/孔), 37℃孵箱孵育90分鐘;

  3.棄掉板內(nèi)液體,洗板2次;

  4.加入生物素化抗體工作液(100μl/孔),37℃孵箱孵育60分鐘;棄掉板內(nèi)液體,洗板3次;

  5.除空白孔外,加入酶結(jié)合物工作液(100μl/孔)。37℃孵箱,避光孵育30分鐘;棄掉板內(nèi)液體,洗板5次

  6.加入TMB顯色工作液(包括空白孔)100μl/孔,37℃孵箱,避光孵育,當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)曲線高濃度的顏色較深,有明顯的顏色梯度的時(shí)候,即可終止。試驗(yàn)顯色反應(yīng)請(qǐng)勿超過(guò)30分鐘;

  7.加入終止液(包括空白孔)100μl/孔,混勻后即刻測(cè)量OD(450nm)值(10分鐘內(nèi))。

  8.計(jì)算標(biāo)本待測(cè)因子含量。

  注意事項(xiàng)

  1.試劑盒使用前請(qǐng)保存在2-8℃。除復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品,其他成分不可凍結(jié)。

  2.濃縮生物素化抗體,濃縮酶結(jié)合物體積小,運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置,會(huì)使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請(qǐng)用手甩幾下或1000rpm離心1分鐘,以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。

  3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,使結(jié)晶溶解后再配制洗滌液。

  4.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,凍干標(biāo)準(zhǔn)品為一次性使用,不得分裝。因其濃度較低,溶解兩小時(shí)候后,會(huì)迅速失活。

  5.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

  6.配制試劑時(shí),要用旋渦混合儀混勻。加入孔內(nèi)的試劑,充分混勻?qū)y(cè)試結(jié)果尤為重要,最好使用微量振蕩器(使用頻率),如無(wú)微量振蕩器,可在反應(yīng)前手工輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板1分鐘,例如做圓周動(dòng)作,使加入孔中的反應(yīng)液混勻。

  7.實(shí)驗(yàn)用酶標(biāo)儀應(yīng)嚴(yán)格按使用說(shuō)明書規(guī)范操作,并在使用前充分預(yù)熱。

  8.酶免實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測(cè)時(shí)建議作復(fù)孔。

  9.將不用的微孔板放進(jìn)原鋁箔袋中,置2-8℃保存。

  10.顯色液對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

  11.超過(guò)使用有效日期的試劑盒不能應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)中。

  12.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),波長(zhǎng)應(yīng)該設(shè)置為450nm和630nm.

  13.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時(shí)必須注意安全。

  14.各步驟加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校準(zhǔn)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

  15.每次試驗(yàn)測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔最高濃度的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)。

  16.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

  17.以洗板機(jī)洗板時(shí),每孔注液量不應(yīng)少于350μl, 注意檢查加樣頭是否堵塞。手工洗板時(shí), 用帶紙屑的吸水材料應(yīng)慎重, 防止外源性過(guò)氧化物酶類似物或氧化還原物與顯色劑發(fā)生反應(yīng)。

  18.用終止液終止反應(yīng)后,請(qǐng)于10分鐘內(nèi)讀取OD值。

  19.進(jìn)行復(fù)孔實(shí)驗(yàn)時(shí),結(jié)果計(jì)算一定要求平均值。

  20.標(biāo)本溶血可能會(huì)有假陽(yáng)性結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

  21.試驗(yàn)時(shí),應(yīng)該將加過(guò)樣品的板條放于密閉盒內(nèi),并保持濕度約60%左右;

  22.為保證恒溫箱內(nèi)的溫度為37℃,恒溫箱的溫度要經(jīng)常校準(zhǔn)。以確保實(shí)驗(yàn)溫度保持恒定。

  精密度

  批間差:CV%<10%;批內(nèi)差:CV%<8%

  儲(chǔ)存

  -20℃,短期4℃

  有效期

  12個(gè)月

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