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產(chǎn)品快訊:人(AT-Xa)ELISA試劑盒

更新時間:2024-09-30    點擊次數(shù):1107

  人(AT-Xa)ELISA試劑盒

  在生物醫(yī)學研究與臨床診斷的廣闊領(lǐng)域中,ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)試劑盒作為一種高效、靈敏且特異的檢測技術(shù),扮演著舉足輕重的角色。專注于檢測人體中抗凝血酶(Antithrombin,簡稱AT)與活化凝血因子X(Activated Factor X,簡稱FXa)形成的復合物——AT-Xa,為評估機體的凝血與抗凝平衡狀態(tài)提供了有力的工具。BUNSEN本文將從人(AT-Xa)ELISA試劑盒的原理、應(yīng)用、操作步驟、注意事項以及未來發(fā)展趨勢等方面進行深入探討。

  一、人(AT-Xa)ELISA試劑盒的原理

  人(AT-Xa)ELISA試劑盒基于抗原-抗體反應(yīng)的原理,利用特異性抗體捕獲樣本中的AT-Xa復合物,并通過酶標二抗進一步放大信號,最終通過顯色反應(yīng)(如四甲基聯(lián)苯胺TMB的氧化反應(yīng))來定量檢測AT-Xa的含量。這一過程不僅要求抗體的高度特異性和親和力,還需要精確控制反應(yīng)條件以確保結(jié)果的準確性和可重復性。

  二、人(AT-Xa)ELISA試劑盒的應(yīng)用

  1. 血栓性疾病的診斷:AT是體內(nèi)最重要的生理性抗凝物質(zhì)之一,它能與FXa等凝血酶原酶復合物結(jié)合,抑制其活性,從而防止血液過度凝固。因此,檢測AT-Xa水平對于評估血栓形成的風險具有重要意義,尤其是在深靜脈血栓形成、肺栓塞等血栓性疾病的診斷中。

  2. 抗凝治療的監(jiān)測:在肝素等抗凝藥物的治療過程中,監(jiān)測AT-Xa水平可以幫助醫(yī)生調(diào)整藥物劑量,確保達到最佳的治療效果,同時避免出血等副作用的發(fā)生。

  3. 心血管疾病的風險評估:近年來,越來越多的研究表明,凝血與抗凝系統(tǒng)的失衡與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此,人(AT-Xa)ELISA試劑盒也被用于心血管疾病的風險評估,為早期干預提供科學依據(jù)。

  三、人(AT-Xa)ELISA試劑盒的操作步驟

  一、實驗前準備

  1. 樣本收集與處理

  樣本采集:確保采集的樣本(如血清、血漿、尿液等)新鮮無污染,避免溶血和反復凍融。血清樣本應(yīng)在采集后盡快分離,并保存于2-8℃條件下,長期保存需置于-20℃。

  樣本稀釋:根據(jù)試劑盒說明書要求,使用樣本稀釋液對血清或血漿樣本進行適當稀釋。通常,稀釋比例需根據(jù)樣本中目標物質(zhì)的預期濃度進行調(diào)整。

  2. 試劑準備

  試劑盒平衡:將ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫下平衡20-30分鐘,確保所有試劑恢復至室溫。

  洗滌液準備:若試劑盒中的洗滌液為濃縮型,需在使用前恢復至室溫,并根據(jù)說明書要求用蒸餾水或去離子水進行稀釋。注意檢查洗滌液中是否有結(jié)晶析出,必要時進行水浴加熱溶解。

  其他試劑:確保所有需要的試劑(如標準品、檢測抗體、底物等)均已準備齊全,并按照說明書要求進行稀釋或配置。

  二、操作步驟

  1. 設(shè)定孔板

  取出板條:從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的ELISA微孔板條,未使用的板條應(yīng)立即密封并放回冰箱保存。

  設(shè)定孔位:在微孔板上設(shè)定標準品孔、樣本孔和空白孔??瞻卓變H加入樣本稀釋液,不加入任何樣本或標準品。

  2. 加樣

  標準品孔:向各標準品孔中依次加入不同濃度的標準品溶液,每孔50μL。

  樣本孔:向樣本孔中先加入10μL待測樣本,再加入40μL樣本稀釋液,確??傮w積為50μL。

  3. 孵育

  封閉:使用封板膜將微孔板密封,避免蒸發(fā)和污染。

  溫育:將密封好的微孔板放入恒溫孵育箱或水浴鍋中,在溫度下(通常為37℃)孵育一定時間(如60分鐘),使樣本中的抗原與微孔板上的抗體充分結(jié)合。

  4. 洗滌

  棄液:孵育結(jié)束后,輕輕棄去孔內(nèi)液體,注意避免交叉污染。

  洗滌:向每孔中加入洗滌液,靜置片刻后輕輕甩去洗滌液,并在吸水紙上拍干。重復洗滌5次或按照說明書推薦的次數(shù)進行。

  5. 加檢測抗體

  加檢測抗體:向各孔(除空白孔外)中加入適量的檢測抗體(如辣根過氧化物酶標記的抗體),通常為100μL。

  再次孵育:重新密封微孔板,并在相同溫度下孵育一段時間(如30分鐘),使檢測抗體與樣本中的抗原結(jié)合。

  6. 洗滌與顯色

  重復洗滌:按照步驟4中的方法進行洗滌。

  加底物:向每孔中加入底物A和底物B各50μL,輕輕混勻。

  避光孵育:在37℃條件下避光孵育一段時間(如15分鐘),使底物與檢測抗體發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生顏色變化。

  7. 終止與讀數(shù)

  加終止液:向每孔中加入終止液50μL,終止顯色反應(yīng)。

  讀數(shù):在波長(如450nm)下,使用酶標儀測定各孔的吸光度(OD值)。注意,使用空白孔進行調(diào)零。

  三、結(jié)果分析

  繪制標準曲線:根據(jù)標準品孔的OD值和已知濃度,繪制標準曲線。

  計算樣本濃度:根據(jù)樣本孔的OD值,在標準曲線上查找對應(yīng)的濃度值。注意,如果樣本進行了稀釋,最終濃度需乘以稀釋倍數(shù)。

  結(jié)果判定:根據(jù)試劑盒說明書中的判定標準,對樣本結(jié)果進行解釋和判斷。

  四、注意事項

  操作規(guī)范:嚴格按照試劑盒說明書進行操作,避免人為誤差。

  環(huán)境控制:保持實驗環(huán)境整潔、干燥,控制溫度和濕度在適宜范圍內(nèi)。

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