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小鼠雙鏈RNA(dsRNA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明

更新時間:2023-06-16    點擊次數(shù):5189

  小鼠雙鏈RNA(dsRNA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

 

  本試劑盒僅供研究使用。

  小鼠雙鏈RNA(dsRNA)試劑盒檢測范圍:

  96T

  3ng/L -180ng/L

  使用目的:

  本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中雙鏈 RNA(dsRNA)含量。

  實驗原理

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠雙鏈 RNA(dsRNA)水平。用純化的雙鏈RNA(dsRNA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入雙鏈 RNA(dsRNA),再與 HRP 標記的抗體結合,形成抗體-抗原-抗體復合物,經(jīng)過洗滌后加底

  物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雙鏈 RNA(dsRNA)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中小鼠雙鏈 RNA(dsRNA)濃度。

  試劑盒組成

  1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

  2 酶標試劑 6ml×1 瓶

  8 標準品(320ng/L) 0.5ml×1 瓶

  3 酶標包被板 12 孔×8 條

  9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

  4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶

  10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶

  11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶

  12 密封袋 1 個

  標本要求

  1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

  2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  操作步驟

  1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

  160ng/L

  5 號標準品

  150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

  80ng/L

  4 號標準品

  150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

  40ng/L

  3 號標準品

  150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

  20ng/L

  2 號標準品

  150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

  10ng/L

  1 號標準品

  150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

  2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

  3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

  4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。

  7. 溫育:操作同 3。

  8. 洗滌:操作同 5。

  9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

  10 分鐘.

  10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

  11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

  操作程序總結:

  計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標 準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。

  小鼠雙鏈RNA(dsRNA)試劑盒注意事項

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 1 小時后方可使用,酶標包被板開封后如未用完, 板條應裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

  3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。

  4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計 算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6.底物請避光保存。

  7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

  8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號組分不得混用。

  保存條件及有效期

  1.試劑盒保存:;2-8℃。

  2.有效期:6 個月

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